EAT. چودينوف، V.A. پلاتونوف، A.V. اليگزينڊروا، S.N. ايلانسڪي
اهو تازو ڏيکاريو ويو آهي ته ascomycete fungus Ilyonectria crassa آلو جي tubers کي متاثر ڪرڻ جي قابل آهي. هن ڪم ۾، پهريون ڀيرو آلو کان الڳ ٿيل I. crassa strain جي ڪجهه فنگسائيڊس جي حياتياتي خاصيتن ۽ مزاحمت جو تجزيو ڪيو ويو آهي. ”آلو“ جي نسلن جي مخصوص علائقن جي ترتيب سان ٺهڪي اچي ٿي، جيڪي اڳ ۾ حاصل ڪيل فنگس لاءِ حاصل ڪيون ويون آهن جيڪي نارڪيسس، گينسينگ، اسپن ۽ بيچ، للي بلب ۽ ٽولي جي پنن جي پاڙن مان الڳ ٿيل آهن. ظاهري طور تي ڪيترائي جهنگلي ۽ باغي ٻوٽا I. crassa جا ذخيرا ٿي سگهن ٿا. تحقيق ٿيل ٻوٽي ٽماٽا ۽ آلو جي سلائسن کي متاثر ڪيو، پر سڄي ٽماٽو ميوو ۽ برقرار آلو ٽبر کي متاثر نه ڪيو. هن مان ظاهر ٿئي ٿو ته I. crassa هڪ زخم پارسائٽ آهي. fludioxonil، difenoconazole ۽ azoxystrobin جي مزاحمت جو اندازو غذائيت جي وچ ۾ انهن دوائن جي اعلي افاديت ڏيکاري ٿو.
EC50 انڊيڪيٽر (فنگسائيڊ جو ڪنسنٽريشن، جيڪو فنگسائيڊ فري ڪنٽرول جي نسبت ڪالوني جي ريڊيل واڌ جي شرح کان 2 ڀيرا سست ٿئي ٿو) 0.4 جي برابر هو؛ 7.4 ۽ 4 mg / l، ترتيب سان. I. crassa جي ڪري بيماري جي ترقي جي امڪان کي نظر ۾ رکڻ گهرجي جڏهن آلو tubers جي phytopathological تشخيص ۽ ٻوٽن جي حفاظت جي قدمن جي ترقي.
phytopathogenic microorganisms جي ترقي آلو جي پوکڻ ۽ ذخيرو ڪرڻ جي سڀني مرحلن تي وڏي نقصان جي ڪري ٿي. جڏهن حفاظتي قدمن جي منصوبابندي ڪندي، ضابطي جي طور تي، معروف پيٿوجنز کي حساب ۾ رکيو ويندو آهي، جهڙوڪ نسلن جي الٽرنيريا، فيوساريم، فوما، هيلمينٿوسپوريم، ڪوليٽوٽريچم، فائيپوٿورا وغيره، پر، تازو سالن ۾، وڌيڪ ۽ وڌيڪ رپورٽون ظاهر ٿيون آهن. آلو تي نئين phytopathogenic microorganisms جي ظاهر جي باري ۾. انهن جي حياتيات خراب طور تي اڀياس ڪئي وئي آهي، انهن جي حوالي سان آلو تي استعمال ٿيندڙ fungicides جي اثرائتي نامعلوم آهي، تشخيصي طريقا ترقي نه ڪيا ويا آهن. وڏي ترقي سان، اهي آلو جي فصل کي اهم نقصان پهچائڻ جي قابل آهن. انهن مائڪروجنزمن مان هڪ آهي Ascomycete fungus Ilyonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous، پهرين دريافت ڪيل ليکڪن پاران آلو جي tubers تي (Chudinova et al.، 2019).
هي ڪم I. crassa strain جي تجزيي جا نتيجا پيش ڪري ٿو جيڪو آلو tubers کان الڳ ٿيل آهي. نوآبادين جي مورفولوجي ۽ I. crassa جي mycelial ڍانچي، نسلن جي مخصوص ڊي اين اي علائقن جي نيوڪليوٽائيڊ تسلسل، آلو ۽ ٽماٽن جي وائرس، ۽ ڪجهه مشهور فنگسائڊس جي مزاحمت جو اڀياس ڪيو ويو.
مواد ۽ طريقا
اسان استعمال ڪيو I. crassa 18KSuPT2 strain 2018 ۾ ڪوسٽروما علائقي ۾ پوکيل متاثر ٿيل آلو ٽيوب کان ڌار ڪيو ويو. ٽيوب سڪي سڙي کان متاثر ٿيو هو جنهن ۾ هڪ گفا هلڪي ناسي مائيسيليم سان ڍڪيل هئي. جراثيم کان بچاءُ واري سوئي کي استعمال ڪندي، فنگل مائيسيليم کي ايگر ميڊيم سان پيٽري ڊش ۾ منتقل ڪيو ويو (بيئر وارٽ 10٪، آگر 1.5٪، پينسلين 1000 يو / ايم ايل). پليٽون 24 ° C تي اونداهي ۾ پکڙيل هيون.
هڪ لييڪا DM2500 لائيٽ مائڪرو اسڪوپ هڪ ICC50 HD ڊجيٽل ڪئميرا سان ۽ هڪ Leica M80 بائنڪولر مائڪرو اسڪوپ سان هڪ IC80HD ڊجيٽل ڪئميرا (Leica Microsystems, Germany) تصوير ڪڍڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو، اسپورس ۽ اسپور جي عضون جي ماپ ۽ مورفولوجي جو اندازو لڳايو.
ڊي اين اي کي ڌار ڪرڻ لاءِ، فنگل مائيسيليم کي مائع مٽر وچولي ۾ وڌو ويو، پوءِ مائع نائيٽروجن ۾ منجمد ڪيو ويو، هوموجنائز ڪيو ويو، CTAB بفر ۾ انڪيوب ڪيو ويو، ڪلوروفارم سان صاف ڪيو ويو، ۽ 2 سيڪڙو شراب سان ٻه ڀيرا ڌويو ويو.
ڊي اين اي ڪڍڻ جو طريقو تفصيل سان بيان ڪيو ويو آهي مضمون ۾ Kutuzova et al. (2017).
ماليڪيولر طريقن سان نسلن جو تعين ڪرڻ ۽ ٻين سڃاتل I. crassa strains سان مقابلو ڪرڻ لاءِ، PCR کي پرائمر سان ڪيو ويو، جنهن ۾ جنس جي مخصوص ڊي اين اي علائقن کي وڌائڻ جي اجازت ڏني وئي: ITS1-5,8S-ITS2 (primers ITS5/ITS4, White et al., 1990)، جيني علائقا b -tubulin (Bt2a / Bt2b، گلاس، ڊونالڊسن، 1995) ۽ ترجمي جي وڌائڻ وارو عنصر 1α (tef1α) (پرائمر EF1-728F / EF1-986R، ڪاربن ۽ ڪوهن، 1999). Evrogen CleanUp کٽ استعمال ڪندي جيل مان گهربل ڊگھائي جا امپليڪن ڪڍيا ويا. اپلائيڊ ٿيل علائقن کي بگ ڊي ® ٽرمينيٽر v3.1 سائيڪل سيڪوئنسنگ ڪٽ (اپلائيڊ بايو سسٽم، CA، USA) استعمال ڪندي ترتيب ڏنو ويو هڪ اپلائيڊ بايو سسٽم 3730 xl خودڪار ترتيب ڏيڻ وارو (Applied Biosystems, CA, USA). نتيجي ۾ نڪتل نيوڪليوٽائيڊ ترتيبون يو ايس نيشنل سينٽر فار بايو ٽيڪنالاجي انفارميشن (NCBI) GenBank ڊيٽابيس ۾ ميچ ڳولڻ لاءِ استعمال ڪيون ويون. Phylogenetic تجزيو ميگا 6 پروگرام (Tamura et al.، 2013) استعمال ڪندي ڪيو ويو.
وائرس جي تشخيص وڏي ميوي واري ٽماٽي (مختلف قسم جي ڊبراوا) ۽ آلو tubers (مختلف گالا) جي سڄي سائي ميون تي ڪئي وئي. ان کان علاوه، خراب ٿيل ميون ۽ tubers کي نقصان پهچائڻ لاء، اسان ساڳئي ميون ۽ tubers جي سلائسن کي استعمال ڪيو. نلڪن جا سلائسس نمي واري ڪمرن ۾ رکيا ويا هئا، جيڪي هيٺان گندي فلٽر پيپر سان پيٽري ڊش هئا. ڪاغذ تي هڪ سلائڊ رکيل هئي، جنهن تي، موڙ ۾، tubers يا ميون جا سلائس رکيل هئا. سڄو tubers ۽ ميوا پڻ ڪنٽينر ۾ رکيا ويا هئا جن ۾ هيٺان گندي فلٽر پيپر هئي. سلائس جي وچ ۾ (يا ٽٻڪن يا ميوي جي محفوظ سطح تي)، اگرر جو هڪ ٽڪرو (5 × 5 ملي ايم) ڦڦڙن سان گڏ 5 ڏينهن کان پوء، wort آگر تي وڌو ويو.
فنگسائڊس جي ڦڦڙن جي مزاحمت جو جائزو ليبارٽري جي حالتن ۾ آگر غذائي مواد جي وچ ۾ ڪيو ويو. اسان فنگسائيڊل دوائن جي حساسيت جو مطالعو ڪيو ميڪسم، KS (فعال جزو فلوڊيڪسونيل، 25 g / l)، Quadris، KS (azoxystrobin 250 g / l)، Scor، EC (difenoconazole 250 g / l) (اسٽيٽ فهرست ...، 2020) ). جائزو ورتو ويو پيٽرري وينجن ۾ وورٽ-اگر وچولي تي اڀياس ڪيل دوائن جي اضافي سان گڏ فعال مادو 0.1 جي ڪنسنٽريشن تي؛ 1; 10 ppm (mg / L) (fludioxonil ۽ difenoconazole لاء)، 1؛ ڏهه؛ 10 پي پي ايم (azoxystrobin لاء) ۽ ميڊيا ۾ فنگسائڊ کان سواء (ڪنٽرول). فنگسائڊ کي هڪ وچولي ۾ شامل ڪيو ويو جيڪو ڳري ويو ۽ 100 ° C تي ٿڌو ڪيو ويو، جنهن کان پوء وچولي پيٽري وينجن ۾ وجھي وئي. فنگل مائيسيليم سان گڏ هڪ آگر بلاڪ پيٽري ڊش جي مرڪز ۾ رکيل هو ۽ اونداهي ۾ 60 ° C تي ڪلچر ڪيو ويو. 24 ڏينهن جي انڪيوبيشن کان پوءِ، نوآبادين جي قطرن کي ماپ ڪيو ويو ٻن باهمي سڌيءَ طرفن ۾؛ هر ڪالوني لاء ماپ جا نتيجا اوسط ڪيا ويا. تجربا ٽن حصن ۾ ڪيا ويا. تجزيو جي نتيجن جي بنياد تي، EC7 ڳڻپيو ويو، فنگسائڊ جي ڪنسنٽريشن جي برابر، جيڪو فنگسائڊ آزاد ڪنٽرول جي نسبت ڪالوني جي ريڊيل ترقي جي شرح کي اڌ ڪري ڇڏيو.
نتيجا ۽ بحث
wort agar سان پيٽري ڊش تي، فنگس سفيد فلوڪولنٽ مائيسيليم سان ڪالونيون ٺاهي ٿي. مائيسيليم جي هيٺان وچولي ڳاڙهي - ناسي ٿي وئي. جڏهن وچون سڪي وڃن ٿا، ته فنگس ٻن قسمن جا اسپور ٺاهي ٿو ۽ ننڍي اسپورڊوچيا ۾ هڪل ۽ گڏ ٿيل ڪونڊيوفورس تي. ميڪروڪونڊيا ڊگھا، سلنڈر، هڪ کان ٽي سيپٽا، سراسري ڊگھائي 27.2 µm، قدرن جي حد سان 23.2 کان 32.2 µm، ويڪر 4.9 µm تائين (تصوير 1). microconidia جي سراسري ڊيگهه 14.3 µm آهي قدرن جي حد سان 10.3 کان 18.1 µm تائين، ويڪر 4.0 µm تائين آهي. سڀ macro- ۽ micromorphological ڪردارن Ilyonectria crassa (Cabral et al.، 2012).
نسلن جي مخصوص ڊي اين اي علائقن (ITS، b-tubulin، TEF 1α) جي ترتيب مڪمل طور تي I. ڪراسا جي اسٽرين جي ترتيبن سان ٺهڪي اچي ٿي جن جو اسان اڳ اڀياس ڪيو (چوڊينووا ايٽ ال.، 2019، ٽيبل 1). ٻين علائقن ۾ I. crassa جي پکڙجڻ جو مطالعو ڪرڻ ۽ متاثر ٿيل ثقافتن جي اسپيڪٽرم جو تجزيو ڪرڻ لاءِ، GenBank ڊيٽابيس ۾ ساڳئي ڊي اين اي ترتيبن جو تجزيو ڪيو ويو (ٽيبل 1). اوورليپ 86 کان 100٪ هو. "آلو" I. ڪراسا جي تنن جي ٽنهي ڊي اين اي علائقن جا تسلسل هالينڊ ۾ للي بلب ۽ ڊافوڊيل جي پاڙن ۽ ڪئناڊا ۾ ginseng جي روٽ کان ڌار ڪيل تناؤ جي تسلسل سان هڪجهڙا هئا. اسان ٻين I. crassa strains کي ڳولڻ جي قابل نه هئاسين ٽن تجزيي ڪيل هڪجهڙائي واري ترتيب سان کليل ڊيٽابيس ۾. بهرحال، جمع ٿيل ITS ۽ b-tubulin sequences جي تجزيي ڏيکاري ٿي I. crassa جي موجودگي برطانيه ۾ tulip جي پنن تي. ساڳئي طرح ITS جي ترتيب سان فنگس جي سڃاڻپ ڪئي وئي جڏهن ڪئناڊا ۾ اسپن جي جڙڙن جي مائيڪوبيوٽا ۽ اٽلي ۾ بيچ روٽ، ۽ سعودي عرب ۾ آلو tubers (ٽيبل 1). هن مطالعي جا نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته I. crassa هڪ عالمي تقسيم آهي ۽ مختلف ٻوٽن جي نسلن کي متاثر ڪرڻ جي قابل آهي.
جڏهن 5 ڏينهن تي ٽماٽي ۽ آلو جي سلائسن تي pathogenicity جو اندازو لڳايو ويو ته زخم جو قطر 1.5 سينٽي ميٽر تائين پهچي ويو، ان صورت ۾، تحقيق ڪيل ٻوٽي سڄي ٽماٽي جي ميوي کي متاثر نه ڪيو ۽ برقرار آلو ٽبر. بهرحال، ٽماٽي تي سيپل متاثر ٿيا. آلودگي جي امڪان کي خارج ڪرڻ لاء، آلو جي ٽيوب جي سلائس تي ٺهيل مائيسيليم مان هڪ فنگل ڌار ڌار خالص ڪلچر ۾ الڳ ڪيو ويو. اهو مڪمل طور تي والدين جي دٻاء سان هڪجهڙائي هئي. بظاهر، I. crassa هڪ زخم پارسائٽ آهي.
ٻج جي نلڪن جي پوک کان اڳ ڦڦڙن سان علاج پوکڻ واري موسم دوران ٻوٽن تي بيمارين جي ترقي کي گھٽائي ٿو. مؤثر فنگسائڊس جي چونڊ لاء، اهو ضروري آهي ته اهو اندازو لڳايو وڃي ته انهن مان ڪهڙيون I. сrassa جي خلاف اثرائتي آهن. ڪم فنگائڊس جي وسيع فعال مادي جو اڀياس ڪيو - فلوڊيڪسونيل، azoxystrobin، difenoconazole. Fludioxonil ڪيترن ئي مرکبن ۾ ٺاهيو ويندو آهي جيڪو پوکڻ کان اڳ ٻج ۽ ٻج جي نلڪن کي ڊريسنگ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي. Fludioxonil (Maxim) پڻ ذخيرو ڪرڻ کان اڳ ٻج جي tubers جي علاج لاء استعمال ڪيو ويندو آهي. Difenoconazole ۽ azoxystrobin پڻ ڪيترن ئي تيارين ۾ شامل آهن جيڪي ٻج جي مواد جي پروسيسنگ لاءِ استعمال ڪيا ويندا آهن، ۽ گڏوگڏ ٻوٽن جي پروسيسنگ لاءِ تيار ڪيل تيارين ۾ (State catalog ...، 2020).
I. crassa جي ترقي جي شرح ميڊيا تي اڀياس ڪئي وئي (تصوير 2) فعال اجزاء جي مختلف ڪنسنٽريشن سان: fludioxonil (EC50 = 0.4 ppm)، azoxystrobin (EC50 = 4 ppm)، ۽ difenoconazole (EC50 = 7.4 ppm) (ٽيبل 2). ). اهي تياريون I. crassa جي خلاف انتهائي اثرائتو سمجهي سگهجن ٿيون، ڇاڪاڻ ته انهن جو EC50 tubers جي علاج لاءِ استعمال ٿيندڙ ڪم ڪندڙ مايع ۾ تياري جي تجويز ڪيل ڪنسنٽريشن کان گهڻو گهٽ آهي. اسٽيٽ ڪيٽلاگ جي مطابق ... (2020)، آلو جي tubers جي علاج لاء مائع ۾ fludioxonil جو مقدار 500 کان 1000 ppm، azoxystrobin (furrow جي تري جي علاج لاء مائع ۾) - 3750-9375 ppm، difenoconazole (ٻوٽن جي علاج لاءِ مائع ۾) - 187.5-625 پي پي ايم.
جدول 1. Genbank ڊيٽابيس ۾ موجود اسٽرين 18KSuPT2 ۽ Ilyonectria crassa جي strains جي نسلن جي مخصوص ترتيبن جي هڪجهڙائي
دٻاءُ | ميزبان ٻوٽو ، خارج ٿيڻ واري جاءِ | GenBank ۾ جمع ڪيل ترتيب نمبر، هڪجهڙائي جو سيڪڙو | لنڪ | ||
مان | β-ٽيوبلين | TEF 1α | |||
17KSPT1 ۽ 18KSuPT2 | پٽاٽو ٽيوب ، ڪوسٽروما علائقو | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova et al.، 2019، هي ڪم |
سي بي ايس 158/31 | Narcissus roots، هالينڊ | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Cabral et al.، 2012 |
سي بي ايس 139/30 | للي بلب، هالينڊ | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | Ginseng روٽ، ڪئناڊا | اي 295311 99.4 | JF735395 100 | جي ايف 735 / 725 99.6 |
|
RHS235138 | Tulip پتي، UK | KJ475469 100 | KJ513266 100 | اين ڊي | ڊينٽن، ڊينٽن، 2014 |
MT294410 | اسپن روٽ، ڪئناڊا | MT294410 100 | اين ڊي | اين ڊي | رامس فيلڊ وغيره.، 2020 |
ايڪسڪسينم | بيچ، اٽلي | KR019363 99.65 | اين ڊي | اين ڊي | تِزاني ، هيگي ، موتي. سڌو سنئون جمع ڪرائڻ |
KAUF19 | پٽاٽو ٽيوب، سعودي عرب | HE649390 98.3 | اين ڊي | اين ڊي | گاشگري، غرباوي، 2013 |
ND = جمع نه ٿيل
ٽيبل 2. Ilyonectria crassa جي مزاحمت فنگسائڊس کي
(فعال مادو) | EC50، پي پي ايم | ||||
3 ڏينهن | 5 ڏينهن | 7 ڏينهن | |||
ڪنٽرول | 17 2 | 33 5 | 47 3 | ||
Quadris، KS (fsoxystrobin) | 18 1 | 34 2 | 48 2 | ||
11 1 | 11 1 | 12 1 | |||
11 1 | 11 1 | 12 1 | |||
ميڪسم، KS (fludioxonil) | 16 1 | 28 2 | 48 2 | ||
7 1 | 13 3 | 19 4 | |||
5 1 | 12 1 | 17 5 | |||
اسڪور، اي سي (ڊفينوڪونازول) | 18 1 | 35 2 | 48 1 | ||
11 1 | 24 3 | 35 4 | |||
11 1 | 13 1 | 17 3 |
اسان جي ڪم ۾، ڪوسٽروما ۽ ماسڪو (چوڊينووا ايٽ ال.، 2019) علائقن ۾ I. crassa strains کي آلو tubers کان الڳ ڪيو ويو. ITS sequences سان فنگل strains جو هڪ وڏو تناسب I. crassa سان ملندڙ جلندڙ آهي سعودي عرب ۾ آلو tubers جي mycobiota جي تجزيي ۾ پڌرو ڪيو ويو (Gashgari and Gherbawy, 2013). بظاهر، I. crassa آلو تي ايترو ناياب ناهي جيترو اهو لڳي سگهي ٿو. اسان جي تجربن ۾، اهو ڏيکاريو ويو آهي ته فنگس خراب ٽماٽو ميون کي متاثر ڪري سگهي ٿي. ادب مان اهو معلوم ٿئي ٿو ته I. crassa مٽي ۾ saprotrophically ترقي ڪرڻ جي قابل آهي (Moll et al., 2016)، انهي سان گڏ مختلف قسم جي ٻوٽن کي به متاثر ڪري ٿو، حتي ٽيڪني طور تي پري ٻوٽن جهڙوڪ ڊافوڊيل، للي، ginseng، aspen، ۽ بيچ (ٽيبل 1). XNUMX). ظاهري طور تي ڪيترائي جهنگلي ۽ باغي ٻوٽا I. crassa جا ذخيرا ٿي سگهن ٿا. مٿي ڄاڻايل ڏيکاري ٿو ته جڏهن حفاظتي قدمن کي ترقي ڪندي، اهو ضروري آهي ته هن فنگس سان آلو tubers کي متاثر ڪرڻ جي امڪان کي ڌيان ڏيڻ گهرجي. آلو جي tubers جي علاج لاءِ وڏي پيماني تي تياريون جن ۾ fludioxonil، azoxystrobin ۽ difenoconazole شامل آهن، I. crassa جي خلاف اعلي فنگسائيڊل افاديت ڏيکاريا آهن.
اهو ڪم روسي فائونڊيشن فار بيسڪ ريسرچ (گرانٽ نمبر 20-016-00139) پاران سهڪار ڪيو ويو.
مضمون شايع ٿيو جرنل ”پلانٽ پروٽيڪشن بليٽن“، 2020، 103 (3)